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dc.creatorAlmeida, Isabelle Ponciano-
dc.date.accessioned2023-07-21T18:36:33Z-
dc.date.available2023-07-21T18:36:33Z-
dc.date.issued2023-07-21-
dc.date.submitted2023-03-27-
dc.identifier.citationALMEIDA, Isabelle Ponciano. Marcadores microssatelites e ensaio elisa auxiliam na seleção de linhagens no melhoramento genético do milho. 2023. 65p. Dissertação (Mestrado Profissional em Genética e Melhoramento de Plantas) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2023.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/58178-
dc.description.abstractThe growing demand for increased grain production, combined with the significant reduction in productive performance triggered by pest attacks, makes corn (Zea mays) one of the main targets of transgenic technology. The transgenics currently on the market aim to protect crops from pest attack, resistance to herbicides and drought, and among other benefits that, consequently, contribute to the good performance of the genetically modified crop. Transgenic lines developed after genetic transformation play the role of donor parents during the introgression process of a new transgene in breeding programs. These donors are then crossed with recurrent parents, which constitute lines with desirable agronomic characteristics. The genotypes resulting from this crossing are crossed again with the recurrent parent, a process known as backcrossing. This conversion process can be extended until obtaining lines with satisfactory fixation of the recurrent parent's alleles and, at the same time, expressing the transgene of the donor lineage. The use of marker-assisted selection (SAM) and ELISA assays in breeding are tools that can help in the selection of lines during the breeding process. Therefore, the objective of this work was to verify the efficiency of using microsatellite molecular markers (SSR) and the ELISA assay to evaluate the rate of allele fixation and quantification of the transgenic protein, respectively, of populations, at different stages of conversion, referring to to 3 strains (L1, L2 and L3). To assess the rate of recovery by SSR, DNA extractions were conducted from each individual to be analyzed. The DNA was then subjected to amplification using SSR markers, previously selected according to the polymorphic profile between donor and recurrent parents. The obtained PCR products were evaluated in a genetic analyzer and,from the results, the inference of the rate of fixation of the alleles of the recurrent parent was made for each strain analyzed. To evaluate the expression of the transgene, the extraction of total proteins was performed. The protein extract obtained from each strain was used to quantify the target protein using competitive ELISA. The genetic similarity inferred that L1 presented a recovery rate between 98.438 and 100.00% already in the fourth generation of backcrossing and three generations of selfing (RC4S3). On the other hand, in L2 after five generations of backcrossing and two generations of selfing (RC5S2) it presented recovery of 86.111%. L3 showed recovery of 100.00% already in the third generation of backcrossing and five generations of selfing (RC3S5). The Elisa assay was efficient for detecting the protein concentrations of all analyzed individuals. Furthermore, it was found that in the L1 and L3 strains there was no variation in protein concentration between individuals at different stages of conversion, indicating that successive backcrosses did not negatively interfere with the expression of the transgene under study. However, for the samples analyzed from L2, protein detection was inefficient and protein concentration oscillation between different stages of conversion was observed.pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Lavraspt_BR
dc.rightsacesso abertopt_BR
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectZea Mayspt_BR
dc.subjectRetrocruzamentopt_BR
dc.subjectBackcrossingpt_BR
dc.subjectEnsaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)pt_BR
dc.subjectMilho - Melhoramento genéticopt_BR
dc.subjectTécnicas Moleculares no melhoramento genéticopt_BR
dc.titleMarcadores microssatelites e ensaio elisa auxiliam na seleção de linhagens no melhoramento genético do milhopt_BR
dc.title.alternativeMicrossatellite markers and Elisa assists in the selection of lineages in corn genetic improvementpt_BR
dc.typedissertaçãopt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação do Mestrado Profissional em Genética e Melhoramento de Plantaspt_BR
dc.publisher.initialsUFLApt_BR
dc.publisher.countrybrasilpt_BR
dc.contributor.advisor1Pereira, Welison Andrade-
dc.contributor.advisor-co1Silva Neta, Izabel Costa-
dc.contributor.referee1Silva Neta, Izabel Costa-
dc.contributor.referee2Condé, Aurinelza Batista Teixeira-
dc.description.resumoA crescente demanda pelo aumento da produção de grãos, aliada à redução significativa da performance produtiva desencadeada pelo ataque de pragas, torna a cultura do milho (Zeamays) um dos principais alvos da tecnologia de transgênicos. Os transgênicos presentes atualmente no mercado objetivam a proteção de culturas ao ataque de pragas, resistência a herbicidas e à seca, e dentre outros benefícios que, consequentemente, contribuem para o bom desempenho da cultura geneticamente modificada. Linhagens transgênicas desenvolvidas após a transformação genética desempenham o papel de genitores doadores durante o processo de introgressão de um novo transgene nos programas de melhoramento. Estes doadores são então cruzados com genitores recorrentes, os quais constituem linhagens com características agronômicas desejáveis. Os genótipos oriundos deste cruzamento são novamente cruzados com o parental recorrente, processo designado como retrocruzamento. Este processo de conversão pode ser estendido até que se obtenha linhagens com fixação satisfatória dos alelos do genitor recorrente e ao mesmo tempo, que expressem o transgene da linhagem doadora. O uso da seleção assistida por marcadores (SAM) e de ensaios ELISA no melhoramento são ferramentas que podem auxiliar na seleção de linhagens durante o processo de melhoramento. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência do uso de marcadores moleculares microssatélites (SSR) e do ensaio ELISA para avaliação da taxa de fixação de alelos e quantificação da proteína transgênica, respectivamente, de populações, em diferentes estágios de conversão, referentes a 3 linhagens (L1, L2 e L3). Para avaliação da taxa de recuperação por SSR, foram conduzidas extrações de DNA de cada indivíduo a ser analisado. O DNA foi então submetido à amplificação utilizando marcadores SSR, previamente selecionados de acordo com o perfil polimórfico entre genitores doadores e recorrentes. Os produtos de PCR obtidos foram avaliados em analisador genético e, a partir dos resultados, foi feita a inferência da taxa de fixação dos alelos do genitor recorrente para cada linhagem analisada. Para avaliação da expressão do transgene, foi realizada a extração de proteínas totais. O extrato proteico obtido de cada linhagem foi utilizado para quantificação da proteína alvo utilizando ELISA competitivo. A similaridade genética inferiu que a L1 apresentou taxa de recuperação entre 98,438 até 100,00% já na quarta geração de retrocruzamento e três gerações de autofecundação (RC4S3). Por outro lado, na L2 após cinco gerações de retrocruzamentos e duas gerações de autofecundação (RC5S2) apresentou recuperação de 86,111%. A L3, apresentou recuperação de 100,00% já na terceira geração de retrocruzamento e cinco gerações de autofecundação (RC3S5). O ensaio Elisa apresentou eficiência para a detecção das concentrações proteicas de todos os indivíduos analisados. Além disso, foi constatado que nas linhagens L1 e L3 não houve variação na concentração das proteínas entre indivíduos em diferentes estágios de conversão, indicando que os sucessivos retrocruzamentos não interferiram negativamente na expressão do transgene em estudo. No entanto, para as amostras analisadas da L2, a detecção proteica foi ineficiente e foi observada oscilação da concentração proteica entre diferentes estágios de conversão.pt_BR
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Naturaispt_BR
dc.subject.cnpqGenética de Populações Quantitativa e Molecularpt_BR
dc.creator.Latteshttps://lattes.cnpq.br/1721085340868421pt_BR
Aparece nas coleções:Genética e Melhoramento de Plantas - Mestrado Profissional (Dissertações)

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