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dc.creatorEleutério, Mateus William de Faria-
dc.date.accessioned2020-07-10T11:40:22Z-
dc.date.available2020-07-10T11:40:22Z-
dc.date.issued2020-07-10-
dc.date.submitted2020-02-06-
dc.identifier.citationELEUTÉRIO, M. W. de F. Ensaio cometa no modelo vegetal Lactuca sativa: uma abordagem metodológica. 2020. 57 p. Dissertação (Mestrado em Botânica Aplicada) – Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2020.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufla.br/jspui/handle/1/41783-
dc.description.abstractThe comet assay is the most frequently used test for assessing DNA breaks. This assay presents relevant contribution to a number of areas, especially, genetic and environmental toxicology. The DNA breaks can occur in its single and double strands triggered by different mechanisms as an effect of physical, chemical or biological agents, producing aneugenic and clastogenic effects. The comet assay can be applied to various organisms, tissues and cell types. In plant models, this assay is recognized as a useful test which provides information about damage caused by genotoxic and mutagenic compounds. Its adaptation to plant models dates from 1991. At the beginning, plant models such as Nicotiana tabacum, Vicia fava and Allium cepa were commonly employed in the comet assay. Adjusting comet assay to new organisms, tissues and cell types requires standardization, optimization and calibration, which is assessed by means of DNA damage inducers, for example, Methyl methanesulfonate (MMS) and hydrogen peroxide (H2O2). Additionally, some parameters, such as nucleoid obtention, denaturation time, lysis solution efficiency and voltage level during electrophoretic run are relevant in order to achieve an effective performance with reliable results. Among a number of plant models, Lactuca sativa stands out for presenting easy cultivation, high seed yield and fast initial growth. Thus, this study aims to increase comet assay reproducibility and reliability in the Lactuca sativa plant model, through the optimization of experimental steps allowing a higher count of sampled nucleoids. Moreover, the obtention of comets with adequate shapes during electrophoretic migration was also the aim of the present study. Thus, a more reliable semi-automated scoring method, reduced evaluation time as well as faster assessment of results can be achieved. The methodological information obtained during optimization of essential steps in the comet assay applied to Lactuca sativa, presented here, will bring relevant directions that can be used to reduce time overall, number of sample repetitions and costs related to methodological performance.pt_BR
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Lavraspt_BR
dc.rightsrestrictAccesspt_BR
dc.subjectEnsaio cometapt_BR
dc.subjectFragmentação de DNApt_BR
dc.subjectLactuca sativapt_BR
dc.subjectComet assaypt_BR
dc.subjectDNA fragmentationpt_BR
dc.titleEnsaio cometa no modelo vegetal Lactuca sativa: uma abordagem metodológicapt_BR
dc.title.alternativeComet assay in the Lactuca sativa plant model: a methodological approachpt_BR
dc.typedissertaçãopt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Botânica Aplicadapt_BR
dc.publisher.initialsUFLApt_BR
dc.publisher.countrybrasilpt_BR
dc.contributor.advisor1Vieira, Larissa Fonseca Andrade-
dc.contributor.advisor-co1Marcussi, Silvana-
dc.contributor.referee1Marcussi, Silvana-
dc.contributor.referee2Preté, Paulo Sérgio Castilho-
dc.contributor.referee3Santos Filho, Norival Alves-
dc.description.resumoO ensaio cometa é o teste mais comum para avaliação de quebras no DNA, com relevante contribuição para diferentes áreas, sobretudo, na toxicologia genética e na toxicologia ambiental. As quebras na molécula de DNA podem ser em suas simples e duplas fitas, por diferentes mecanismos, sendo resultantes da ação de agentes físicos, químicos ou biológicos, produzindo efeitos aneugênicos e clastogênicos. O ensaio cometa é passível de ser aplicado à diversos organismos, tecidos e tipos celulares. Em modelos vegetais é reconhecido como um teste útil que traz informações sobre danos causados por compostos genotóxicos e mutagênicos. Sua adaptação para o modelo vegetal data do ano de 1991. Inicialmente, os modelos vegetais mais comuns empregados na técnica foram Nicotiana tabacum, Vicia fava e Allium cepa. A aplicação do ensaio cometa em novos organismos, tecidos e tipos celulares requer a padronização, otimização e calibração dos resultados a serem observados por meio de indutores de danos conhecidos como, por exemplo, o Metil metanossulfonato (MMS) e o peróxido de hidrogênio (H2O2). Adicionalmente, parâmetros como obtenção e tempo de desnaturação dos nucleóides, eficiência da solução de lise em modelos vegetais e voltagem aplicada durante a etapa de eletroforese são essenciais para uma boa execução do ensaio, proporcionando resultados confiáveis. O modelo vegetal Lactuca sativa se mostra um bom modelo para aplicação do ensaio cometa, apresentando características como facilidade no cultivo, alta produção de sementes e rápido desenvolvimento inicial. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi aumentar a reprodutibilidade dos resultados obtidos e portanto a confiabilidade do ensaio cometa no modelo vegetal Lactuca sativa, por meio da otimização de parâmetros experimentais que permitam maior contagem de nucleóides amostrados, bem como formação adequada dos cometas durante a migração eletroforética, de modo que estes possam ser avaliados por software em método de escore semi automatizado mais confiável, reduzindo o tempo de avaliação e obtenção dos resultados. As informações metodológicas obtidas durante a otimização de parâmetros essenciais para o ensaio cometa aplicado em Lactuca sativa, apresentados no presente trabalho, trarão direcionamentos importantes, reduzindo tempos experimentais e números de repetições amostrais e dos custos com a execução da metodologia.pt_BR
dc.publisher.departmentDepartamento de Biologiapt_BR
dc.subject.cnpqBotânica Aplicadapt_BR
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/8962290334167815pt_BR
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